慢活干探丁志摩带领的“杂项调查小队”(ME)，专门处理琐碎案件，与世无争。直至急进派“大肚婆”龙丽莎加入，争住做队中“尸王”，从此改写小队的命运。丽莎破案“无底线”，跟志摩的作风大相径庭，两人在查案过程中一直互不咬弦。车奕晨为面子当差，却因失误致同袍伤残，自此散漫成性。他在ME却重遇旧情人谷芷晴，并与警队小鲜肉李俊基，展开三角关系。一次行动，揭露志摩多年秘密，加上奕晨之失误，令丽莎陷于生死关头……
这是一个讲述香港海关的故事，透过版权及商标调查科高级监督海锋(袁伟豪 饰)、贸易管制处总贸易管制主任关佩欣(黄智雯 饰)、海关毒品调查课监督温芷祺(王敏奕 饰)，三人带领一众海关菁英及年青新晋，包括有见习督察陈家兴(陈家乐 饰)，由鸡蛋管到原子弹、由奶粉管到白粉，海陆空全天候，展示出智慧海关的新面貌。这一群人，在自身的逆境里，也能够跨越难关，秉持“护法守关、专业承担”的宗旨，为本地社会的稳定与繁荣作出贡献，是香港人引以为傲的“把关者们”。
以香港80年代号称东南亚第一的销金窝“万国城”夜总会为故事舞台，呈现金光闪耀、躁动热烈的香港霓虹时代，一班来自不同阶层的午夜丽人——妈妈桑沙律（陈法蓉 饰）、助理大班&警花卧底Michelle（姚子羚 饰）、“万国城”头牌Monica（蔡洁 饰）等汇聚于此，见证着彼此的浮沉与挣扎、闪亮与熄灭，也卷入了风起云涌的情欲纠葛、江湖争斗之中。
该剧以单元形式展开讲述女法医“JD宋安妍”（蔡卓妍 饰）在“死因解码研究所”的遭遇为线索，协助警方破获一个个诡异案件，同时试图探寻父亲旧案的真相，并与神秘女子林小美（钟欣潼 饰）、热血探员刘志明（张孝全 饰）之间展开的一系列惊心动魄的故事。女主角“JD宋安妍”因患HSP“高敏症”而拥有极高敏感度的大脑，不由自主全天候接收一切资讯，在不堪其扰的同时也屡次凭借信息储备量非凡的“最强大脑”打开线索关窍，解开悬案谜题。
人心，是一门深奥的科学。人会犯罪作恶，皆因被贪婪、愤怒、软弱和嫉妒等情绪支配。为了逃避刑责，人会利用谎言掩饰真相，用诡计扰乱视线，令法证工作难上加难。未破的悬案、消失的证据、迷失的困局，都是法证团队面对的一个个难关。纵然过程中会受到打击，但他们都会坚持初心，跌倒之后重新出发，不会放弃追寻真相。 《法证先锋V》的案件和布局更加让人意想不到，唯有靠着“法证部”、“法医科”及“重案组”这灭罪铁三角，秉承前四季的理念，通力合作，找出真凶，还生者公道，替死者雪冤。
